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技術文章

微生物去甲腎上腺素(NA)elisa試劑盒使用說明

點擊次數:161   發布時間:2022/11/21 10:03:09

使用目的:
本試劑盒用于測定微生物樣本中去甲腎上腺素(NA)含量。
 
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中去甲腎上腺素(NA)水平。用純化的去甲腎上腺素(NA)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入去甲腎上腺素(NA),再與HRP標記的去甲腎上腺素(NA)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過che底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的去甲腎上腺素(NA)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中去甲腎上腺素(NA)濃度。
 
操作步驟
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
    2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30后棄去,如此重復5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11. 測定:以空白孔調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
 
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個月

原創作者:上海恒遠生物技術發展有限公司

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